產(chǎn)品介紹
細(xì)胞名稱：腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞
形態(tài)特性：上皮細(xì)胞
生長(zhǎng)特性：貼壁生長(zhǎng)
特征特性：我們推薦使用AAV-293細(xì)胞株繁殖腺病毒相關(guān)重組病毒。 AAV-293源自普遍使用的 HEK293細(xì)胞株，但產(chǎn)生的病毒滴度更高。 HEK293細(xì)胞是剪切過(guò)的腺病毒5型DNA轉(zhuǎn)染的人胚腎細(xì)胞。 跟HEK293細(xì)胞一樣，AAV-293細(xì)胞反式表達(dá)腺病毒E1基因，當(dāng)共轉(zhuǎn)染三個(gè)AAV助質(zhì)粒(一個(gè)含ITR的質(zhì)粒，pAAV-RC, 和E1缺失助質(zhì)粒)時(shí)，可以產(chǎn)生有感染力的腺病毒-相關(guān)病毒顆粒。
培養(yǎng)條件： DMEM-H：
Dulbecco＇s Modified
傳代方法：消化3-5分鐘。1：
2。3天內(nèi)可長(zhǎng)滿。
傳代情況： P(10+5)
凍存條件：完全培養(yǎng)基+8%DMSO
產(chǎn)品名稱 | 腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞 |
英文簡(jiǎn)稱 | AAV-293 |
狀態(tài) | 貼壁 |
細(xì)胞冷凍保存：
1.凍存液：92%完全培養(yǎng)基+8%DMSO（可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件自行選擇）
2.降溫步驟：4度10min，-20度2h，-80過(guò)夜后液氮保存。
細(xì)胞培養(yǎng)的操作步驟：
1.腺病毒轉(zhuǎn)化的人胚腎細(xì)胞吸走用于培養(yǎng)基，加入3-5mL PBS后輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)瓶潤(rùn)洗細(xì)胞；
2.吸干凈PBS后加入1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA，輕輕搖晃培養(yǎng)皿使胰酶浸沒(méi)細(xì)胞表面，培養(yǎng)瓶放37度培養(yǎng)箱消化；
（細(xì)胞對(duì)于消化比較敏感，消化過(guò)度會(huì)嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)，導(dǎo)致細(xì)胞傳代死亡漂浮或者傳代后不長(zhǎng)。細(xì)胞消化到細(xì)胞間隙變大但未脫落，可以輕輕吹下時(shí)即可終止，禁止消化到細(xì)胞完全漂浮?；靹蚣?xì)胞時(shí)盡量輕柔，不要吹出大量氣泡。）
3.加入6-8ml完全培養(yǎng)基終止消化，輕輕吹下細(xì)胞混勻；
4.將混勻的細(xì)胞1000rpm（約150g）離心3min，棄上清，再用新鮮培養(yǎng)基重懸37度培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)；
傳代比例: 不同細(xì)胞生長(zhǎng)速度不一，具體傳代比例視細(xì)胞生長(zhǎng)速度而定，大部分細(xì)胞適用1:3-1:4傳代，生長(zhǎng)較慢的細(xì)胞可以1:2傳代。
