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Cas9穩(wěn)定表達的人子宮內(nèi)膜腺癌細胞;HEC-1-B-Cas9-589培養(yǎng)細胞培養(yǎng)步驟

發(fā)表時間:2022-07-20 13:22

Cas9穩(wěn)定表達的人子宮內(nèi)膜腺癌細胞;HEC-1-B-Cas9-589培養(yǎng)細胞培養(yǎng)步驟:

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:

1、準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。

2、培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3、凍存液:90%完全培養(yǎng)基,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。

二、細胞處理:

1、復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓毎麘乙杭尤?0cm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2、細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

己糖激酶(HK)試劑盒

丙酮酸激酶(PK)試劑盒

磷酸果糖激酶(PFK)試劑盒

磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶(PEPC)試劑盒

丙酮酸(PA)測試盒

抗壞血酸(AsA)含量測試盒

脫氫抗壞血酸(DHA)含量測試盒

L-半乳糖苷-1,4-內(nèi)酯脫氫酶(Gal LDH)測試盒

抗壞血酸氧化酶(AAO)活性測定試劑盒

抗壞血酸過氧化物酶(APX)測定試劑盒

單脫氫抗壞血酸還原酶(MDHAR)測試盒

脫氫抗壞血酸還原酶(DHAR)活性測定試劑盒

雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒

雙縮脲法蛋白含量測定試劑盒

考馬斯亮藍法蛋白含量測定試劑盒

考馬斯亮藍法蛋白含量測定試劑盒

BCA蛋白法含量測定試劑盒

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(GPT)試劑盒

谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)試劑盒

谷氨酰胺合成酶(GS)試劑盒

脯氨酸(PRO)含量試劑盒

氨基酸(AA)含量測定試劑盒

半胱氨酸(Cys)含量測定試劑盒

谷氨酸(Glu)含量試劑盒

ATP含量試劑盒

ADP含量試劑盒

AMP含量試劑盒

Na+k+   ——ATP酶試劑盒

Ca++Mg++ ——ATP酶試劑盒



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